Sommario
A cosa serve il clonaggio del DNA?
Clonaggio, con riferimento a frammenti di DNA, è un insieme di metodi sperimentali nella biologia molecolare che descrive l’assemblaggio di molecole ricombinanti e, dunque, una serie di tecniche con le quali è possibile ottenere più copie di una determinata sequenza nucleotidica, non necessariamente di natura genica.
A cosa servono i vettori di clonaggio?
VETTORI DI CLONAGGIO Quelli più utilizzati sono basati su DNA di plasmidi o sul DNA del batteriofago lambda. Vettori di clonaggio: utilizzato per amplificare, in un sistema in vivo, un frammento di DNA. Vettori di espressione: utilizzato per esprimere un gene contenuto nel frammento di DNA clonato.
Come si ottiene un gene di interesse?
Il gene di interesse si inserisce attraverso un processo di “taglia e cuci” molecolare: gli enzimi di restrizione riconoscono una sequenza, tagliano in quel punto, dove vi si inserirà il gene di interesse. Quindi, un plasmide da circolare diventerà lineare.
A cosa serve una libreria genomica?
Una libreria genomica è un insieme di segmenti di DNA provenienti dal genoma di un individuo di una data specie. Ogni segmento è trasportato di solito da un plasmide o da un fago. Le librerie genomiche sono utilizzate per clonare un particolare gene contenuto nel genoma della specie da cui è stata ottenuta la libreria.
Come separare i frammenti di DNA dopo il taglio?
Per separare i frammenti di DNA dopo il taglio con gli enzimi di restrizione si utilizza un gel di agarosio ( figura A), un polisaccaride che si ricava dalle alghe. Il gel è posto in uno stampo di forma rettangolare; a una delle estremità del gel si trovano delle piccole cavità verticali chiamate pozzetti, allineate a formare una fila.
Quali sono gli elementi indispensabili all’avvio della duplicazione di DNA?
Gli elementi indispensabili all’avvio della duplicazione di DNA: DNA elicasi, DNA topoisomerasi, proteine SSB. La zona in cui i due filamenti di DNA sono separati è detto forca di replicazione.
Quanto dura il processo di duplicazione del DNA batterico?
Il processo di duplicazione del DNA batterico dura all’incirca 40 minuti. Schema generico della duplicazione del DNA batterico. Il genoma eucariotico è notevolmente più grande rispetto a quello procariotico e richiederebbe circa tre settimane per essere replicato completamente se il processo iniziasse a partire da una sola origine.